背景技术

现阶段，配方奶粉、配方保健食品和矿物质补充剂是几种常见的促进骨骼生长补充剂选择，这些补充剂主要通过提供人体正常需求的物质成分起到促进骨骼生长的功效。然而，配方奶粉、配方保健食品的销售价格通常比较昂贵，长期服用，成本较高；服用矿物质补充剂容易出现补充过量的情况，对身体造成损害，从而降低身体各方面机能。近年来，益生菌在促成长产品中的应用成为研究的热点。

中国发明专利CN116904378 A公开了一株促进骨成长的约氏乳杆菌JYLO-010。经试验验证，该菌株能够显著提高小鼠体内的25-羟基维生素D含量，进而促进小鼠对钙的表观吸收率，从而显著提高小鼠的股骨骨密度；此外，约氏乳杆菌JYL0-010还可以有效促进成骨细胞的增殖、分化和成熟并抑制破骨细胞形成。同时，随着研究的不断深入，维生素K2被发现具有激活骨钙素、增加骨矿化等功效，在骨代谢方面具有积极作用。基于此，发掘更多不同种、属分类的具有促进骨成长及提供维生素K2功效的益生菌，具有重要意义。

针对目前缺乏具有骨成长促进作用的乳酸乳球菌的技术问题，本发明提供一株促进骨成长的乳酸乳球菌乳亚种JYLL-72及其应用和制剂。

本发明通过检测发酵液维生素K2含量，筛选出乳酸乳球菌乳亚种JYLL‑72，该菌株能够参与骨代谢，促进骨骼发育。

功能菌株动物实验

1.生长发育指标评估

每两周测量一次幼鼠的身长（从鼻尖到肛门），结果如下表所示。

不同组别不同生长时间幼鼠的身长（单位：cm）

由表数据可得，各组幼鼠在初始第一天身长无明显差异，14天身长出现差异，表明JYLL‑72菌粉能显著促进幼鼠身长的增长，对整体生长发育起促进作用。

2.粪便状况评分

在实验第14天收集幼鼠的粪便，对幼鼠的粪便状况进行评分。

不同组别幼鼠14天的粪便状况评分

结果如表所示，对照组粪便状况有中度问题，随着JYLL‑72剂量的增加，粪便状况对应变好，说明JYLL‑72菌粉可以显著改善幼鼠的粪便状况，从而维护肠道健康，保证其正常生长。

3.血清指标检测

采用自动生化分析仪（Chemray 240）检测血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）水平。IGF‑酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒，检测血清中的IGF‑1浓度。

不同组别幼鼠血清指标水平

如表数据可以看出，JYLL‑72中剂量组和JYLL‑72高剂量组的血清中ALT、AST和ALP含量与对照组相比差异性显著，JYLL‑72菌粉能维护血清中的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和碱性磷酸酶水平，进而维护肝脏功能，肝脏是IGF‑1的主要分泌器官，继而提高血清中的IGF‑1含量。

4.骨骼免疫组化分析

采用免疫组织化学法对胫骨切片进行分析。将切片脱水封片，显微镜镜检并采集图像，使用Image‑Pro Plus 6 .0软件定量评估切片中的平均光密度值（ IOD），以分析胫骨中OPG、RANKL和CTSK蛋白表达的水平，结果如表所示。

不同组别幼鼠胫骨中OPG、RANKL和CTSK蛋白表达水平

OPG和RANKL均是成骨细胞分泌的蛋白，OPG可以抑制RANKL的生理作用并促进骨形成，RANKL促进破骨细胞的形成。CTSK蛋白在破骨细胞中高度表达，而RANKL能够刺激CTSK的表达，进一步促进破骨细胞的活性。